讓你從零開始搞懂PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)

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PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR (Polymerase Chain Reaction),，中文翻譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),，取名效法“原子核裂變鏈?zhǔn)椒磻?yīng)” ,。其反應(yīng)效果也是名符其實(shí),，通過一對(duì)預(yù)先設(shè)計(jì)的引物,、耐熱的DNA聚合酶以及反應(yīng)原料，即可在體外模擬DNA復(fù)制的過程：

→首先將待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈;

→隨之冷卻至某一溫度時(shí),，引物與待擴(kuò)增模板序列發(fā)生退火結(jié)合;

→再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸,。

接下來介紹一下標(biāo)準(zhǔn)的PCR 實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域，分別為：

1.試劑配制區(qū);

2.樣品處理區(qū);

3.核酸擴(kuò)增區(qū);

4.產(chǎn)物分析區(qū);

設(shè)計(jì)要點(diǎn)

PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式,。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制,、樣品處理,、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，若實(shí)驗(yàn)工藝需要,，還應(yīng)增加樣品粉碎過程,。

一、分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室

所謂分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室,，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn),，呈分散布置形式。對(duì)于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室,，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾,，因此無需特殊條件要求。

二,、組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室

所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室, 是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置,，組成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。對(duì)于組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室,，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)間集中布置,，容易造成相互干擾，因此,，對(duì)總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求,。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換,。
基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室又稱PCR實(shí)驗(yàn)室,，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,。
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑準(zhǔn)備區(qū),、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),。為避免交叉污染,，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向原則，即只能從試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),，不得逆向流動(dòng),。

基本要求：
1、各區(qū)域必須是相互獨(dú)立的,；
2,、各區(qū)域的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的；
3、各區(qū)完全獨(dú)立,，緩沖間可有可無,。如為一個(gè)區(qū)套一個(gè)區(qū)的模式，區(qū)間不能直通,，必須有緩沖間,，保證兩個(gè)區(qū)域間始終處于隔離狀態(tài)；
試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制,，分裝和保存,，本區(qū)氣壓應(yīng)保持微正壓。主要設(shè)備有天平,、冰箱,、離心機(jī)、加樣器,、振蕩器,、紫外燈。
標(biāo)本制備區(qū)：實(shí)驗(yàn)室樣品的混樣和測(cè)試樣品的制備,。工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,，安裝排風(fēng)系統(tǒng)。主要設(shè)備有冰箱,、生物安全柜,、離心機(jī)、加樣器,、振蕩器,、恒溫水浴、紫外燈,。
擴(kuò)增區(qū)：PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入,，核酸擴(kuò)增。工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,，安裝排風(fēng)系統(tǒng),。主要設(shè)備有核酸擴(kuò)增設(shè)備、冰箱,、潔凈工作臺(tái),、離心機(jī)、加樣器,、紫外燈,。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。工作區(qū)為負(fù)壓,，安裝排風(fēng)系統(tǒng),。使用儀器有酶標(biāo)儀,、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等,。
PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃圖